第一次使用顯微注射法將DNA遞送至線蟲體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)發(fā)生在1991年。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，常規(guī)質(zhì)粒DNA被注射到線蟲的遠(yuǎn)端性腺。注射后的DNA進(jìn)入性腺細(xì)胞細(xì)胞核中形成染色體以外的質(zhì)粒微陣列，并可以遺傳到下一代。該種技術(shù)存在多種局限：首先，常規(guī)質(zhì)粒形成的微陣列在多個(gè)世代后其表達(dá)水平可能會(huì)不穩(wěn)定。第二，該方式產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是嵌合體，意味著有一些細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染了而另一些則沒(méi)有。

關(guān)于該載體系統(tǒng)的更多信息，請(qǐng)參照下列文獻(xiàn)。

我們的載體經(jīng)過(guò)專門優(yōu)化，整合了啟動(dòng)子近端的內(nèi)含子序列在載體骨架上，可以在線蟲中高水平表達(dá)目的基因。

技術(shù)簡(jiǎn)單：向線蟲轉(zhuǎn)染質(zhì)粒載體是技術(shù)上相對(duì)直接且對(duì)比病毒載體需要包裝生產(chǎn)而更為簡(jiǎn)單的方式?？梢允褂秒娹D(zhuǎn)染、顯微注射或者喂食包含質(zhì)粒載體的大腸桿菌等方式將質(zhì)粒導(dǎo)入線蟲體內(nèi)。

裝載量大：我們的載體可以容納總共約30 kb的DNA。該質(zhì)粒的骨架部分只占約2.25 kb，因此留下了巨大的空間用于插入用戶的目的基因。

高表達(dá)水平：合成的啟動(dòng)子近端的內(nèi)含子序列被整合至載體骨架，可以帶來(lái)很高水平的基因表達(dá)。

載體DNA無(wú)法整合基因組：常規(guī)質(zhì)粒載體主要以游離體DNA的形式存在于細(xì)胞中而且通常不整合基因組。如果質(zhì)粒載體含有抗藥性基因的表達(dá)盒，那么載體DNA穩(wěn)定整合細(xì)胞基因組可以對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行藥篩。

可轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型有限：使用常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同的細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染效率差異可能很大。

基因遞送效果的不均一性：盡管高水平表達(dá)的轉(zhuǎn)基因容易實(shí)現(xiàn)，但是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的均一性可能較差。有些細(xì)胞攜帶較多的質(zhì)?？截?，有些則攜帶較少的拷貝甚至沒(méi)有。

Promoter: The promoter driving your gene of interest is placed here.

Synthetic intron: This is placed in proximal to promoter to promote gene expression.

Kozak: Kozak consensus sequence. This is placed in front of the start codon of the ORF of interest to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

3' UTR+polyA: Allows transcription termination and polyadenylation of mRNA transcribed by RNA polymerase II. It functions in somatic and germ cells.

Ampicillin:  Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.